可见分光光度计的原理及常见用途说明

　　

　　一、工作原理：

　　分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光线透过测试的样品后，部分光线被吸收。样品对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该样品的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度,即可计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定，故又称比色分析。

　　

　　二、设备常见用途：

　　可见分光光度计是在可见光区域内对物质做定性、定量分析。常见的用途有以下几种：

　　（1）比色法蛋白质定量

　　比色法的测定原理是组成蛋白质的氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。

　　

　　（2）核酸的定量

　　核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。

　　

　　（3）OD600细菌细胞密度

　　实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验，需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。